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新加坡石斑魚虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

更新時間1:2025-09-30 信息編號:093n46v41489b0 舉報維權(quán)
新加坡石斑魚虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
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供應(yīng)商 上海聯(lián)祖生物科技有限公司 店鋪
認(rèn)證
報價 人民幣 4490.00元每盒
關(guān)鍵詞 熒光定量PCR試劑盒,新加坡石斑魚虹彩病毒
所在地 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661
何君
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2年

產(chǎn)品詳細介紹

PCR檢測試劑盒產(chǎn)品簡介

產(chǎn)品介紹:


產(chǎn)品名稱:新加坡石斑魚虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱:Singapore Grouper Iridovirus(SGIV)

產(chǎn)品貨號:LZ-P4040

規(guī)格:50T

分類:PCR檢測試劑盒

儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。

運輸:低溫、避光。

有效期:一年

如何進行 PCR 實驗?


一、準(zhǔn)備實驗材料(1)DNA模板:包含你想要復(fù)制的DNA區(qū)域。上海(2)引物:短的單鏈DNA片段,用于指導(dǎo)DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一種酶,用于合成DNA。(4)四種脫氧核苷酸(dNTPs):DNA的構(gòu)建塊。(5)緩沖液:提供適宜的反應(yīng)環(huán)境。(6)鎂離子或其它必需的離子:通常作為DNA聚合酶的輔助因子。二、設(shè)定反應(yīng)混合物將所有材料混合在微量離心管中?;旌衔锏目傮w積通常在20-50微升之間。

截圖21.png


  1. 3. PCR程序(1)將混合物放入PCR機(熱循環(huán)儀)中,并設(shè)定程序。PCR程序通常包括以下階段:(2)初次變性:加熱至94-98°C,持續(xù)幾分鐘,使DNA雙鏈解開成單鏈。(3)循環(huán)步驟(通常進行30-40次循環(huán)):(4)變性階段:加熱至94-98°C,持續(xù)20-30秒,使DNA雙鏈解開。(5)退火階段:降溫至50-65°C,持續(xù)20-40秒,允許引物與模板DNA結(jié)合。(6)延伸階段:加熱至72°C,持續(xù)1分鐘每1千個堿基,以便DNA聚合酶合成新的DNA鏈。(7)后延伸:在72°C下持續(xù)5-10分鐘,確保所有可用的DNA模板都被復(fù)制。(8)保持階段:將溫度降至4-15°C,直到用戶準(zhǔn)備取出樣品。

實驗步驟:


一.新加坡石斑魚虹彩病毒樣品制備

1.PCR擴增并檢測。根據(jù)不同的引物挑選適合的退火溫度進行PCR擴增。擴增產(chǎn)物用2-2.5%的瓊脂糖膠跑水平電泳檢測,上樣量3-5ul。PCR產(chǎn)物為10ng/nl左右為佳。

2.PCR產(chǎn)物與變性buffer混合。在干凈的PCR管底部加入5ul SSCP上樣緩沖液(變性緩沖液,同《分子克隆》中的測序緩沖液),然后在緩沖液中央加入PCR擴增產(chǎn)物。按照經(jīng)驗,擴增效果在瓊脂糖膠上能看出比較亮的帶的樣品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就適當(dāng)增加1.5、2或3不等,同時加大上樣緩沖液的量,比如加3ul的PCR產(chǎn)物,緩沖液加到8ul變性效果更好。

3.PCR產(chǎn)物變性。加好的樣品進行離心,使樣品集中在管底。PCR儀上95℃變性10分鐘,立即取出PCR產(chǎn)物連同架子一同置于冰上靜置5min,以免變性的產(chǎn)物復(fù)性。

6.jpg



PCR實驗的基本步驟:


DNA聚合酶是實驗室中常用的生物學(xué)酶之一,在PCR實驗中具有重要的作用。實驗室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。

一、熒光定量PCR試劑盒Taq聚合酶:

Taq聚合酶是由Thermus aquaticus細菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶,在分子生物學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用。Taq聚合酶具有熱穩(wěn)定性,可以在高溫條件下保持活性,這是由于其來源于熱液生物,能夠存活和正?;顒佑诟邷丨h(huán)境。這使得Taq聚合酶在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)中起到關(guān)鍵的作用。Taq聚合酶能夠按照DNA模板合成新的DNA鏈,因此在PCR中用于擴增目標(biāo)DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,導(dǎo)致其生成的PCR產(chǎn)物末端容易出現(xiàn)額外的腺嘌呤堿基。因此,在某些應(yīng)用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。

二、Pfu聚合酶:

Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus細菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的熱穩(wěn)定性和耐酶性。這使得Pfu聚合酶在高溫PCR反應(yīng)中表現(xiàn)出色,其高度穩(wěn)定的酶活性能夠確保PCR反應(yīng)的可靠性和準(zhǔn)確性。此外,Pfu聚合酶還具有3'-5'外切酶活性,可以修復(fù)并糾正PCR反應(yīng)中的腺嘌呤堿基誤配,有效防止誤差累積。因此,Pfu聚合酶適用于需要高度準(zhǔn)確的PCR擴增和DNA測序。

三、Tth聚合酶:

Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8細菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有熱活性反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄酶活性,可以將RNA模板合成相應(yīng)的DNA鏈。因此,Tth聚合酶在逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)中得到廣泛應(yīng)用,用于將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA,并通過增加熱活性酶來實現(xiàn)PCR擴增。此外,Tth聚合酶還具有一定的外切酶活性,可用于修復(fù)和校正PCR產(chǎn)物的末端。

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新加坡石斑魚虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒0酸化受體底物-1抗體



所屬分類:化學(xué)助劑/試劑盒

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