酶聯(lián)吸附測(cè)定原理
ELISA遵守以下3個(gè)核心原理：1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其學(xué)活性;2)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其學(xué)和酶學(xué)活性;3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關(guān)鍵的作用，常用于ELISA法的酶有辣根過(guò)氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過(guò)氧化物酶為多。酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物,它不僅具有抗體抗原特異的反應(yīng)，還能催化酶促反應(yīng)，顯示出生物放大作用。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)法操作總結(jié)
對(duì)于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作，一些老師可謂是得心順手，操作起來(lái)很流暢，但對(duì)于一些實(shí)驗(yàn)新手，大概只是背熟了理論概況，在實(shí)踐上，還是缺乏經(jīng)驗(yàn)，不知從何下手，今日，BUNSEN本生為幫助大家更好更順利的完成實(shí)驗(yàn)，特對(duì)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行了總結(jié)，一起來(lái)看看吧：
1. elisa實(shí)驗(yàn)中每一個(gè)步驟都要認(rèn)真對(duì)待，省去任何一個(gè)步驟或者不認(rèn)真對(duì)待都可能導(dǎo)致elisa實(shí)驗(yàn)的失敗
2. tip頭吸完后馬上從移液器上取下來(lái)，以免忙亂的時(shí)候又以同一tip汲取另一種試劑
3. elisa實(shí)驗(yàn)開始前認(rèn)真做個(gè)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，做實(shí)驗(yàn)時(shí)要專心致志，不要三心二意操作，必要時(shí)候進(jìn)行記錄以便后期尋找出錯(cuò)原因，在有部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)出來(lái)時(shí)。
4. 每次elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)束，也要及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)報(bào)告
5. 在加入試劑之前,把它混勻一下,以免放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)濃度不均對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響
6. elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)束后整理實(shí)驗(yàn)臺(tái)，養(yǎng)成良好習(xí)慣
7. 做實(shí)驗(yàn)一定要有計(jì)劃,這個(gè)不是為了出文章
8. elisa實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分享實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
9. 所有的東西都要標(biāo)記好日期藥品名稱濃度等
10. 移液槍用完之后要?dú)w到大計(jì)量的位置，防止時(shí)間導(dǎo)致彈簧失去彈性
11. 不使用酶標(biāo)槍時(shí)不建議一直拿在手里，特別是里面還有液體的時(shí)候不可以倒過(guò)來(lái)
12. 做完實(shí)驗(yàn)需洗手，離開實(shí)驗(yàn)室前或進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前注意水，電是否安全
13. elisa試驗(yàn)開始之前需查閱資料的時(shí)候，如若記要表明出處，方便日后查找
14. 一定要記著關(guān)水浴箱
15. 很多實(shí)驗(yàn)室的槍頭是回收的

Elisa試劑盒有幾種檢測(cè)方法：
雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;
4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌;
6.’后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

主營(yíng)產(chǎn)品: 實(shí)驗(yàn)室耗材,pcr耗材,elisa試劑盒,吸頭

本生(天津)健康科技有限公司是一家從事健康科技技術(shù)開發(fā)銷售的公司，公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)。 本生(天津)健康科技有限公司由具有行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的業(yè)人士組成，于為生命科學(xué)研究域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。 既能滿足研發(fā)類客戶對(duì)產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。 產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材（八聯(lián)管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等），ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，培養(yǎng)基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過(guò)濾器及實(shí)驗(yàn)室常用耗材。 品種類超過(guò)萬(wàn)種，廣泛應(yīng)用于科研院校、中心實(shí)驗(yàn)室、分子生物學(xué)等科研域。 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。

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