Na+k+ ——ATP酶測試盒微量法說明書
微量法 100管/48樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性：
產品名稱：Na+k+ ——ATP酶測試盒微量法
貨號：LZ-S01129
規(guī)格 : 100管/48樣
測試方法:微量法
產品分類：氧化磷酸化系列
發(fā)貨地：上海
測定意義:
Na+K+- ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷
測定原理:
Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液：液體 100mL ×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 6mL 蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝
后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑三：液體 2mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。用時加入 3mL 蒸餾水， 4℃保存。
試劑五：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周。
試劑六：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周。
試劑七：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。
試劑八：10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
生化檢測試劑盒操作步驟：
一、?準備工具和環(huán)境?：確保操作臺面干凈、整潔，這是進行科學實驗的步。
?二、?仔細閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?：按照說明書的指導，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。
?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產生泡沫，以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?：混合后，耐心等待試劑盒的反應，這個時間可以用來進行其他活動，但不要著急，因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?：時間到后，仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示，告訴你如何根據顯示的線條或顏色來判斷結果。
NAD+和 NADH 的提取:
1 血清（漿）中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提?。喊凑昭澹{）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1mL 血清（漿），加入 1mL 酸性提取液），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。NADH 的提?。喊凑昭澹{）體積（mL）：堿性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1mL 血清（漿），加入 1mL 堿性提取液），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2 組織中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提?。喊凑战M織質量（g）：酸性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1g組織，加入 1mL 酸性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
NADH 的提?。喊凑战M織質量（g）：堿性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1g
組織，加入 1mL 堿性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提?。篘AD+的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：酸性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。NADH 的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：堿性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
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